本发明涉及检验检疫领域,旨在提供一种能检测多种禽呼吸道病原的多重连接探针扩增鉴别试剂盒。该试剂盒中包括:预扩增引物混合液,含有序列如SEQ ID NO:1~14所示预扩增引物;探针混合液,含有序列如SEQ ID NO:15~28所示的左侧探针和右侧探针;MLPA缓冲液;连接缓冲液A;连接缓冲液B;连接酶Ligase‑65;PCR反应混合液,含有序列SEQ ID NO:29和30所示的通用引物;SALSA聚合酶;阴性对照;阳性对照。本发明所述试剂盒具有高通量特点,能同时检测7种病原,利用全自动核酸分析仪,每次可同时检测96个样品,为病原体的鉴别诊断和应急诊断提供高通量检测技术。另外,还具备特异性好和灵敏度高的优点,通过增加RT‑PCR步骤对目标基因进行富集,最低可检出1拷贝的目标基因。